尊龙凯时推出的婴儿利什曼虫探针法荧光定量PCR试剂盒（CAT#: 15-18620）专为检测婴儿利什曼虫而设计，适用于低温运输和-20℃保存，产品保存期为一年。本试剂盒可以帮助科研人员轻松检测引起动物源性内脏利什曼病的婴儿利什曼原虫（Leishmania infantum），其感染通常无症状，却可能在犬类中传播疾病。

产品特点

本试剂盒的主要特点包括：

1. 即开即用，只需提供DNA模板。
2. 配备阳性对照，以便于识别假阴性样品。
3. 反应快速，灵敏度高。
4. 支持进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR，仅用于科研目的。

规格及成分

本试剂盒的详细成分如下：

• 2×Probe qPCR Mix: 600μL（编号：190504a）
• DEPC-H2O: 1mL（编号：180701）
• 婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液: 90μL（编号：15-18620yp）
• 婴儿利什曼虫qPCR阳性对照: 50μL（浓度为1×10⁸拷贝/μL，编号：18620pc）
• 使用手册: 1份（编号：15-18620sc）

运输及保存

本试剂盒需在低温下运输，保存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。用户需要自备DNA样品和超纯水。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

用户可以选择自定义方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为确保不污染样品或本试剂盒的成分，请在独立区域进行以下稀释操作：

1. 标记6个离心管，编号为7、6、5、4、3、2。
2. 每个管加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照，摇匀后得到标准曲线样品。
4. 依次在6号、5号管中重复添加阳性对照，最终得到6个稀释度的标准曲线样品。

三、试剂配制（试剂准备区）

根据需要检测的样品数，准备相应的qPCR管，分别加入以下成分：

• 2×Probe qPCR Mix: 每管10μL
• 婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液: 每管15μL
• DEPC-H2O: 每管65μL

四、添加模板（模板添加区）

依次向qPCR管中加入2μL模板，按照阴性对照、待测样品和阳性对照的顺序，加样后离心30秒，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放入扩增仪器中，进行以下扩增程序：

1. 预变性：95℃，3分钟
2. qPCR反应（40个循环）:
• 95℃，15秒
• 58℃，20秒
• 72℃，20秒（采集FAM通道的荧光信号）

六、结果分析

如果制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，推算样品DNA浓度的log值。如果未制作标准曲线，结果判定如下：

• 阳性对照：Ct值<30，结果呈S型曲线。
• 阴性对照：Ct值≥38，无指数增长。
• 样本检测：Ct值<35为阳性；Ct值≥38为阴性；Ct值在35-38之间需复检。

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