## 哺乳动物蛋白提取试剂盒使用指南

本试剂盒包含以下成分：
- 5X Buffer: 10ml
- 5X NaCl: 10ml
- 5X SDS: 10ml
- 5X DOC: 10ml
- 5X NP-40: 10ml
- 20X PBS: 10ml
- 蛋白酶抑制剂混合物: 0.5ml

### 保存条件

本试剂盒可在常温下储存，唯有蛋白酶抑制剂混合物需在-20°C条件下保存，保质期为24个月。

### 蛋白提取步骤

1. **准备工作**：根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1（v/v）的比例配制细胞裂解缓冲液。每1ml的细胞裂解缓冲液可用于提取106~107个细胞或5~20mg的组织样本。使用前需加入10μl的蛋白酶抑制剂混合物。

2. **样本处理**：
a. **贴壁细胞**：移除细胞生长培养基后，用PBS冲洗细胞两次。加入细胞裂解缓冲液（106~107个细胞/ml），彻底浸泡细胞于冰袋中，并在摇床中孵育30分钟。期间应多次将细胞重悬，最后收集裂解液。
b. **悬浮细胞**：在700xg下离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬并冲洗细胞两次，4°C下离心去除上清。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液（106~107个细胞/ml），置于冰袋中摇床孵育30分钟。
c. **组织样本**：将组织切成小块，用PBS清洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），转移样品到预冷的微量匀浆器中，冰上均匀化组织30~50次。在34°C下以12,000xg离心裂解后的细胞10分钟，以沉淀细胞碎片，或以100,000xg离心45分钟以获得纯净的蛋白质溶液。

3. **收集上清**：把含有蛋白质的上清液转移至冷冻管中，保存在冰上以便立即使用，或将其储存于-70°C的环境中。使用尊龙凯时的试剂盒能够提供优质的蛋白提取效果，有效保护您的实验结果。