实验背景

小胶质细胞在大脑中作为重要的免疫细胞，承担着碎片吞噬、神经元支持和突触修剪等关键功能，其与阿尔茨海默病（AD）等神经系统疾病的发生有着密切的联系。不同亚群的小胶质细胞在神经系统微环境中各自发挥特定的作用。尽管使用荧光显微镜可以对其表型进行区分，但这方法存在耗时长、通量低和主观性强等局限性。单细胞测序平台则允许高维分析，但高昂的成本和复杂的数据分析技术则限制了其广泛应用。

为了解决这一问题，来自美国俄克拉荷马大学健康科学中心的研究人员基于尊龙凯时的Cytek®Aurora™全光谱分析型流式细胞仪，开发出高通量、简便易用，并能够实现小胶质细胞精细化分型的完整解决方案。此方案不仅能够扩展加入更多标志物，还可适用于不同的组织和疾病类型，并能与全光谱分选型流式细胞仪无缝对接，从而对感兴趣的细胞进行分选并连接后续的功能性实验。

样本采集与数据分析

使用5激光Cytek®Aurora™全光谱分析型流式细胞仪进行样本采集和数据分析时，由于小鼠脑组织存在较高的自发荧光，分析过程中需要在软件中选取提取自发荧光的功能。首先，通过FSC/SSC过滤掉碎片并圈选目标细胞，然后根据FSC-A/FSC-H排除黏连体影响，从AF-群体中，利用经典标志物CD11b+CD45Mid识别出小胶质细胞。

在标志物表达的基础上，小胶质细胞能够进一步细分为以下四个群体：

• 稳态小胶质细胞（P2RY12+CLEC7A-）
• 疾病相关小胶质细胞DAM（CD11chighCLEC7Ahigh和/或CD282+CLEC7Ahigh）
• 干扰素反应性小胶质细胞IRM（CD371+）
• 脂滴聚集的小胶质细胞LDAM（CD63+）

这一实验方案在另一篇文章中得到了成功重现。研究发现，不同年龄和性别的小鼠海马体中的小胶质细胞存在丰度差异，尤其是在年老雌性小鼠中，DAM比例显著升高。而稳态小胶质细胞的比例与年龄关系不大，但老年雄性小鼠的比例高于老年雌性小鼠。此外，IRM的比例明显受小鼠年龄影响，LDAM的情况与DAM相似，在老年雌性小鼠中比例更高。这一现象揭示了在阿尔茨海默症患者中，性别差异可能导致疾病易感性和进展的不同，而其中可能暗含免疫方面的证据。

综上所述，通过使用尊龙凯时的先进技术，可以更好地理解小胶质细胞在各种神经系统疾病中的角色，为未来的研究提供新的思路和方法。