尊龙凯时细胞培养指南

本培养指南针对A-498细胞系的培养条件进行介绍，确保您的实验顺利进行。A-498细胞系由Aaronson S建立，源自一位52岁肾癌女性患者，适用于多种生物医学研究。

培养条件

气相条件：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃，使用MEM培养基，添加10% FBS和1% P/S用于细胞的适宜培养。

细胞传代方法

首次传代建议以1:2的比例进行。每两天更换一次培养液。建议您同时购买完整的培养基，尊龙凯时提供非常优惠的价格。

细胞处理与消毒步骤

收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行后续处理。

用显微镜观察细胞的生长情况，并拍照留存（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片的情况下默认收到状态良好。

细胞培养步骤

a. 贴壁细胞传代

若细胞未达到80%的汇合度，收集培养液至离心管中，保留5 ml完全培养基，放置于37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，即进行传代操作。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1-2 ml，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况。细胞大部分圆形脱落后，迅速轻敲培养瓶，加入5 ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，然后吸出悬液，转移至15 ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2 ml的完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8 ml/瓶，并将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 悬浮细胞传代

采用半换液法或离心换液法进行细胞传代：

1. 半换液法：将培养瓶竖立静置1小时，轻轻吸去3 ml培养基，补充3 ml完全培养基。如果培养基颜色变化慢，可直接添加约500 μl FBS，传代时可直接补充5 ml培养基，分为两个培养瓶进行培养。
2. 离心换液法：将细胞悬液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2 ml培养液重悬后将细胞悬液按1:2比例分至新T25瓶中，添加6-8 ml新的完全培养基以维持细胞活力。

c. 细胞冻存

进行冻存时，细胞应生长至覆盖培养瓶的80%面积。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1 ml，轻轻摇匀后观察，待细胞回缩变圆后加入5 ml完全培养液终止消化。
3. 将悬液转移至15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清。
4. 加入1 ml尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管，直接放入-80℃冰箱保存。

d. 细胞复苏

复苏时，请注意以下步骤：

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无冰晶形成，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞转移至含5 ml完全培养基的15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，加入5 ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱继续培养。
4. 次日更换新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项

部分细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。如细胞脱离较多，可将培养液收集至离心管，进行离心后去除死细胞，然后使用胰酶处理，重悬后再按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基。

使用尊龙凯时产品可确保细胞培养的高效和稳定，期待您的实验取得成功。