尊龙凯时的黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1) Elisa试剂盒使用说明。本试剂盒仅用于科研目的，不得用于医学诊断。

试剂盒原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。首先，将标本、标准品和HRP标记的检测抗体依次加入预先包被adropin（AD）抗体的微孔中，经过温育和彻底洗涤后，使用TMB底物显色。在过氧化物酶的催化下，TMB转化为蓝色，最终呈现黄色，颜色深浅与样品中的adropin（AD）浓度正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清： 使用不含热源和内毒素的试管，操作时避免细胞刺激，收集血液后3000转离心10分钟，迅速小心分离血清与红细胞。
2. 血浆： 使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟，取上清。
3. 细胞上清液： 3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆： 将组织加入生理盐水捣碎，3000转离心10分钟取上清。
5. 保存： 若不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，室温下解冻时确保样品均匀充分解冻。

自备物品

• 酶标仪（450nm）
• 高精度加样器及枪头：05-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL
• 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒需在2-8℃下保存，使用前在室温下平衡20分钟。浓缩洗涤液如有结晶，需水浴加热完全溶解后使用。
2. 实验过程中未使用的板条应立即密封保存。
3. S0号标准品作为阴性对照，样本稀释5倍后，最终检测结果需乘以5以得实际浓度。
4. 严格按照说明书中的时间、加液量及顺序进行操作。
5. 所有液体组分使用前需充分摇匀。

试剂盒组成

本试剂盒包括以下组件：
- 微孔酶标板：96孔配置（12孔×8条）或48孔配置（12孔×4条）
- 标准品、样本稀释液、HRP标记的检测抗体、洗涤缓冲液、底物A、B、终止液等。
- 注：标准品浓度依次为：0、25、50、100、200、400 pg/mL

操作步骤

1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，其余用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔及样本孔，标准品孔各加入不同浓度的标准品50μL；样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加样本。
3. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，封住反应孔，37℃水浴或恒温箱温育60分钟。
4. 弃去液体，鸡蛋纸上轻拍干，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去洗涤液，如此重复洗涤5次。
5. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。
6. 每孔加入终止液50μL，15分钟内在450nm波长下测定各孔的OD值。

结果判断

绘制标准曲线，并使用Excel计算各样本浓度值。
本尊龙凯时试剂盒的性能包括：准确性、灵敏度、特异性与重复性，都在行业标准范围内。

免责声明

本试剂盒仅供研究用途，禁止用于临床试验。使用者需自负因使用不当带来的所有后果。请严格按照说明书进行操作，违者后果自负。