293T细胞培养攻略

293T细胞，最初称为293tsA1609neo，属于293（HEK-293）细胞株的一种高转衍生株，因插入了SV40T抗原的温度敏感基因而形成。

一、细胞基本信息

细胞名称：人胚肾细胞

细胞别名：Hek293T; HEK-293T; HEK293T; HEK-293-T; HEK293T; 293-T; 293T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo

种属来源：人

组织来源：肾

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代比例：1:2~1:4，每2-3天换液一次

培养条件：气相：95%空气 + 5%二氧化碳，温度：37℃

冻存条件：冻存液：60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO；存储条件：液氮

安全性：建议在二级生物安全台内操作，并做好个人防护。

二、复苏及传代方法

1. 细胞株的复苏（冻存管）

（1）将冻存管在37℃水浴中迅速完全融化，并适当轻轻摇晃以加速融化。这一步骤有助于提升细胞复苏效果。

（2）用75%酒精擦拭冻存管外壁后再打开。

（3）将完全融化的细胞离心，或转移至无菌的15ml或其他无菌离心管中，400g离心5分钟，去除上清液，避免吸走细胞沉淀，随后用新鲜的完全培养液重悬并转移至培养器皿中，保持混匀，最后置于CO2培养箱中37℃培养。

（4）隔天观察细胞的贴壁或生长状态，并更换培养液。如需暂存无法立即复苏的冻存管，应将其置于-80℃或液氮中。

2. 细胞株的复苏（T25瓶）

（1）将T25瓶脱外包后，用75%酒精擦拭瓶外壁。

（2）在倒置显微镜下检查细胞状态，确认无异常后，用移液器移去多余的培养液，置于CO2培养箱37℃中静置过夜。

（3）隔天观察细胞的贴壁或生长状态，考虑进行换液或传代，传代比例参考1:2~1:4。

三、注意事项

（1）每支冻存管约含1×106个细胞，体积为1ml，预期存活率为60-90%。建议复苏至1个T25瓶或1个6cm培养皿中。如果存活率较低，可消化后转移至35cm培养皿或T125瓶中以促进细胞生长。

（2）如果收到的细胞为常温运输的贴壁细胞，请及时记录是否有漏液或瓶身破损现象。用75%酒精擦拭培养瓶外表后，不要立即打开瓶盖，静置2~4小时后再检查和拍照记录。

（3）如果细胞密度超过85%，请尽快进行传代；如有悬浮细胞出现，置于培养箱静置过夜以帮助其贴壁。若收到的是常温运输的离心管中的悬浮细胞，可直接转移至培养皿或瓶中培养。确保培养液的颜色正常，首次更换时保留一半原培养液，再加入一半新鲜培养液，以避免因培养液或血清差异导致细胞生长不适应，确保细胞的良好生长状态。

（4）细胞培养操作应在生物安全柜中进行，并严格遵守无菌操作。

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